超过百个成功敲入KI案例，海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。
Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。
目前使用Cas9的进行基因KI研究方法，主要应用在目的基因后面加上标签，对目的蛋白进行定位；再有就是通过对小鼠细胞的目的基因进行修饰替换成为人的基因，用于动物的CDX模型等。KI实现的方案包括：使用合成的Oligo或者ssDNA（single-stranded DNA，ssDNA）作为“Donor”来实现长片段的敲入；也可以通过AAV病毒的方式（其病毒以ssDNA的方式存在于细胞核中）导入ssDNA作为“Donor”载体，也可以通过dsDNA片段或者环状质粒作为“Donor”来实现KI的目的。
但是不同的细胞模型KI的效率依然不能令人满意，且不同的细胞系之间的效率差异很大，很多细胞无法实现定点的KI。 Cas9X针对不同的片段的长度和不同的细胞特性使用不同的KI策略：小的片段使用Oligo进行KI，再长一点的使用ssDNA进行KI，如果长度超过1Kb的将使用重组的办法进行KI。针对细胞系的KI效率非常低的，需要先构建Cas9稳转细胞株再进行gRNA和Donor的转染来提高KI效率。Cas9X努力优化实验条件满足不同细胞系和不同片段长度的KI服务需求。
Cas9X将为你的细胞探索最优化的KI实验方案。
| 技术原理图
| 技术流程图
| 案例分析
项目名称：将EGFP敲入人胃癌细胞NCI-N87中的SOX9基因
· 基因编辑与转染：利用CRISPR/Cas9系统，设计并合成了gRNA和Donor载体，以实现EGFP在SOX9基因的特定位点插入（图1）。这些成分通过优化的电穿孔技术导入NCI-N87细胞，实现了高效的敲入。
· 单细胞克隆：使用ClonePlus™技术分离单细胞，以确保单克隆性。
· 筛选与扩增：通过PCR和测序分析单克隆群体的基因组DNA，以确认目标编辑和敲入成功（图2），随后对验证为阳性的克隆进行培养扩增。
图1. EGFP-SOX9 敲入策略
图2. 对NCI-N87细胞中EGFP-SOX9敲入基因的PCR分析
图3.阳性克隆的荧光确认
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