抗体广泛存在于生物医学研究、 诊断和治疗的发展中, 且需求量大。然而, 满足全球市场日益增长的抗体需求量是一个巨大的挑战。为了维持抗体的供求平衡, 科学家们发明了更好的方法来优化抗体的表达, 以达到增加抗体的单体积表达量并减少生产成本。由于新的克隆方法、基因改造技术以及一系列的细胞和载体工程技术, 加上发酵技术上的改进, 这些都使抗体表达大大得益。 哺乳动物细胞是临床抗体药物产品使用的主要表达系统, 主要包括Sp2/0骨髓瘤细胞、 NS0小鼠骨髓瘤细胞、 HEK293人胚胎肾细胞和CHO中国仓鼠细胞, 其中以CHO系应用最为广泛。 | 基于CHO细胞的抗体表达系统简介 细胞株开发常用的CHO细胞:DG44, DUXB11, CHO-S, CHO-K1 WT, CHO-K1 GS-/-
CHO细胞的优点 1. CHO细胞遗传背景清晰, 不易传播人类病毒, 具有很高的安全性, 以CHO作为宿主细胞表达生物蛋白质, 容易被药物审核机构, 如FDA审批通过 CHO细胞的异质性特征 CHO细胞在长期传代过程中存在的稳定性表达问题, 主要体现在: 2. 外源基因随机整合引起的表达不稳定 中国仓鼠卵巢细胞拥有22 条染色体, 其中10 对常染色体及2 条性染色体。而CHO-K1 细胞系则显示出与其有极大的不同,其仅有8 条染色体显示出同普通中国仓鼠染色体相同, 而13个染色体则以“Z” 标志, 因其中包含着染色体重排、 缺失、移位等现象。 | 抗体表达CHO细胞株的构建策略与流程 1. 细胞内的蛋白表达过程 转录 → mRNA加工 → 翻译 → 翻译后折叠与修饰 → 细胞内转运 → 分泌 2. 抗体表达CHO细胞株的构建策略 Representation of different steps involved in building an efficient system for protein expression 3. 重组蛋白表达工程细胞株的构建流程图 载体构建 → 转染 → 细胞池(pool) 筛选 → 单克隆化筛选 → 批次补料培养筛选 → 蛋白质量筛选 → 细胞株最终选定与建库 → 细胞培养工艺开发与生产 (1)重组抗体表达载体构建:载体元件改造, 密码子优化, 信号肽优化等 (2)影响细胞转染环节的因素:转染效率和细胞活性 (3)单克隆筛选:有限稀释法、ClonePix、FACS 细胞的克隆形成是一个缓慢而且效率很低的技术过程,但是很多细胞实验都需要经过一个单克隆生长阶段,为了增加细胞株的克隆形成的效率,我们研发了该款细胞培养基。ClonePlusTM培养基含有多种细胞培养添加成分,包括:
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