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基因激活/抑制/沉默

| CRISPRa(基因激活)/   CRISPRi (基因抑制/沉默)系统

是用于激活/抑制内源性基因转录的强大工具:

1、通过3病毒系统转导,效率更高;

2、可以通过多个sgRNA筛选,获得适合的效果;

3、直接在启动子作用,不受转录本限制;

4、超大基因过表达的理想选择;

5、能够稳定传代,表型稳定;


|   CRISPRa(基因激活)系统

是用于激活内源性基因转录的强大工具,切割失活的Cas9(dCas9)连上转录激活子(如VP64、p65和HSF1),可以有效促进基因组特定位点的转录。研究显示,CRISPRa技术可以使得基因的转录得到了两倍到数千倍的增长,许多基因的活性甚至有了几个数量级的增加。


服务内容

客户提供相关的需要激活表达的基因信息,海星生物将按照基因的生物信息特点,设计gRNA、构建载体、包装病毒通过病毒转染到目的细胞,筛选出激高表达或者合适的gRNA序列,并构建成CRISPRa稳转细胞株,并使用Q-PCR对目的基因表达量进行检测,并依据客户的需求提供单克隆建立和表型的筛选服务。

CRISPRa(基因激活)

CRISPRa技术服务的流程

服务优势

通过内源基因组背景进行激活,激活表达量可以从2倍到几个数量级的提升。

CRISPRa(基因激活)


CRISPRa vs ORF过表达

CRISPRa(基因激活)


|   CRISPRi (基因抑制/沉默)系统

是用于抑制内源性基因转录的强大工具,当dCas9(没有切割活性的Cas9)被引导到靶基因的转录起始位点TSS(transcription start site)时,dCas9能够物理性阻碍RNA聚合酶的通过,导致基因沉默。同时dCas9融合了一个基因抑制结构域,如KRAB结构域,这样的蛋白称之为dCas9-KRAB,可以进一步提高转录抑制的效率。此外,dCas9也可以融合双抑制结构域KRAB-MeCP2,抑制效果更佳。

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由于dCas9-KRAB CRISPRi系统是在DNA水平抑制基因表达,因此适用于多种类型的基因,包括:mRNA、非编码RNA、microRNA、反义转录本、核定位RNA以及聚合酶III 转录本等基因的转录抑制。

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CRISPRi显著的转录抑制效果


服务内容

客户只需要提供要进行敲减的基因和转录本信息,将有海星生物设计gRNA序列,构建病毒载体,病毒包装后转染目的细胞,并根据客户的需求进行筛选出符合敲减水平低gRNA,并提供CRISPRi稳转细胞株的构建和单克隆的扩增筛选的服务。

技术优势

不改变内源基因组背景、基因抑制效果可筛选、适用更多基因种类。

RNAi vs CRISPRi

研究基因功能常见的方法是,减少或者阻断基因表达,然后进行表型分析。RNAi和CRISPRi都是常用的基因表达水平敲低的研究工具。

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RNA干扰(RNAi)靶向细胞质中成熟的RNA,而CRISPRi则在细胞核内阻止转录的起始,因而敲低效果更为显著。此外RNAi的脱靶效应要远远高于CRISPRi。


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CRISPRi的敲低效果显著优于RNAi



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