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筛靶点、构模型、做验证,找海星,做源头创新


CRISPR文库筛选

一、全程DIY一质粒方案

现货文库质粒低至3680

addgene进口,来源可溯

交付: 10 ug质粒,货期: 2周

现货文库质粒:(全基因组敲除文库、全基因组激活文库(CRISPRa)、膜蛋白敲除文库、膜蛋白激活文库(CRISPRa)、激酶基因敲除文库、干扰素刺激基因敲除文库、表观遗传基因敲除文库、代谢基因敲除文库、 泛素化敲除文库、脂质和代谢敲除文库、药物靶点/激酶/磷酸酶敲除文库、转运/线粒体/运动基因敲除文库)


二、超高性价比一病毒方案

超大量筛选方案:1 mg质粒,可获得10 mL病毒

文库病毒包装: 5980元/1 mL; 17800元/5 mL(滴度:1E+08 TU/mL)

适用范围:全基因组敲除文库A库或A+B库


三、超大量筛选-扩增方案

超高性价比方案:5 mL病毒,可筛选5-15个表型压力条件

文库质粒大量扩繁: 6800元/500 ug; 10000元/1 mg

提供NGS质检CoA


四、超省心一整体服务方案

CRISPR文库筛选全套服务: 低至42800

包含:现货文库病毒转染+压力筛选+NGS测序分析

CRISPR Screen高频细胞:

HeLa、HEK293;肺癌A549、LLC;乳腺癌MCF-7、4T1;肝癌SK-Hep-1、Hepa1-6;黑色素瘤A375、B16;结直肠癌HCT116、MC38;食管癌KYSE-150;骨髓瘤MM.1S;胰腺癌PANC-1、PANC02;胚胎成纤维NIH/3T3;胶质瘤U251、BV2


五、增值服务-KO验证方案

5个靶点KO细胞套餐: 低至39900

CRISPR Screen得到的高潜在靶点,通过基因敲除细胞模型进一步验证有效性,实现研究闭环


CRISPR文库筛选-800.jpg


CRISPR-gRNA文库是高通量筛选靶基因的重要工具,可用于大规模或全基因组功能筛选,涉及信号通路、疾病、细胞药物应答、发育、基因调控等方面。海星生物在gRNA文库筛选方面拥有丰富的经验,能够帮助客户快速构建CRISPR KO(基因敲除)、CRISPRa(基因激活)文库CRISPRi(基因抑制/沉默),也可以为客户提供全套的细胞功能筛选服务,涵括文库构建、病毒文库、细胞转染和筛选、NGS测序与数据分析服务。


CRISPR文库筛选的常规流程

文库构建、病毒文库、细胞测试

500+成功“高分”细胞株,请致电400-990-6627 / 18626127718(微信同号)咨询。

服务类型介绍

文库构建、病毒文库、细胞测试

*海星生物提供现货供应,针对Human和Mouse全基因组范围的基因敲除(CRISPR KO)gRNA文库,实现全基因范围内功能基因的高通量快速筛选。

*海星生物还可以按照需求为客户设计合成靶向特定通路或者基因的gRNA订制文库。



案例分析

Nature Genetics,A genome-wide CRISPR screen identifies a restricted set of HIV host dependency factors

美怀特海德研究所、拉根研究所和布罗德研究所的研究人员利用CRISPR-Cas9基因编辑技术找出三个有望用于治疗HIV感染的新靶标。

研究者利用CRISPR敲除筛选的策略,将影响HIV感染,同时又是细胞存活非必需的基因。一共找出5个基因,其中它三个在早前的利用RNA干扰(RNAi)的研究中并未被鉴定。

作者描述:我们的研究HIV感染的主要靶标,并找出在病毒对T细胞的感染中起着最为显著性作用的宿主基因。之前的研究已找出几种宿主依赖性因子,包括HIV侵入CD4阳性T细胞所需的两种蛋白:CD4分子、CCR5,唯一被认为治愈HIV感染的一个人就是接受来自携带这种CCR5突变的供者的骨髓移植。2008年的三项利用RNAi鉴定潜在的宿主依赖性因子的研究鉴定出800多种可能的靶标;但是这些结果很少存在重叠,提示着存在较高的假阳性。

原因是:RNAi抑制但不会完全阻断基因表达,这可能允许靶基因产生足够多的蛋白来允许HIV感染,而且它也能够抑制靶基因之外的其他基因表达,从而导致假阳性结果。利用CRISPR对源自HIV敏感性的CD4阳性T细胞的一种细胞系进行筛选,研究人员鉴定出5个基因:当让它们失活时,会让细胞免受HIV感染,同时不会影响细胞存活。


文库构建、病毒文库、细胞测试


A pooled, genome-wide CRISPR screen for HIV HDFs. (a) Outline of the genome-wide CRISPR screen strategy. WT, wild type; KO, knockout. (b) Flow cytometry analysis (representative of five independent experiments) of cells infected with the HIV-1 strain JR-CSF and expressing GFP as a reporter of productive HIV infection. Where indicated, cells were transduced with sgCCR5 or an sgRNA that does not target protein-coding sequences
in the human genome (nontargeting control). (c) Flow cytometry analysis (representative of three independent experiments) quantifying CD4 and CCR5 expression on the surface of wild-type GXRCas9 cells and GXRCas9 cells that were transduced with the genome-wide sgRNA library and serially infected with HIV-1 strain JR-CSF. (d) Log2-transformed fold change in the abundance of the fifth most enriched sgRNA for every gene following HIV infection. See also supplementary Figure 1 and supplementary table 1. (e) Enrichment of individual sgRNAs for three candidate HDFs and two control genes. Values indicate log2-transformed fold change in abundance following HIV infection. Values for the uninfected group are from GXRCas9 cells that were transduced with the genome-wide sgRNA library and cultured for 3 weeks.


Cas9X 海星生物可以为病毒感染筛选相关的靶向基因提供:全基因组的gRNA病毒、细胞株的构建、验证细胞株的敲除等成熟的技术支撑。

CRISPR基因编辑技术原理

CRISPR基因编辑技术原理.png

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1. Cas9X®基因编辑服务:影响因子为23.65

Wu W, Pu Y, Gao S, et al. Bacterial Metabolism-Initiated Nanocatalytic Tumor Immunotherapy[J]. Nano-Micro Letters, 2022, 14(1): 1-21.


2. Cas9X®基因编辑服务:影响因子为17.694

Bu, J., Zhang, Y., Wu, S. et al. KK-LC-1 as a therapeutic target to eliminate ALDH+ stem cells in triple negative breast cancer. Nat Commun 14, 2602 (2023).


3. Cas9X®基因编辑服务:影响因子为8.322

Li W, Ali T, Zheng C, et al. Fluoxetine regulates eEF2 activity (phosphorylation) via HDAC1 inhibitory mechanism in an LPS-induced mouse model of depression[J]. Journal of neuroinflammation, 2021, 18(1): 1-19.


4. Cas9X®基因编辑服务:影响因子为15.992

Li W, Ali T, Zheng C, et al. Anti-depressive-like behaviors of APN KO mice involve Trkb/BDNF signaling related neuroinflammatory changes[J]. Molecular Psychiatry, 2022, 27(2): 1047-1058.


5. Cas9X®基因编辑服务:影响因子为38.12

Ma B, Ju A, Zhang S, et al. Albumosomes formed by cytoplasmic pre-folding albumin maintain mitochondrial homeostasis and inhibit nonalcoholic fatty liver disease[J]. Signal Transduction and Targeted Therapy, 2023, 8(1): 229.

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