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微生物基因编辑服务

后基因组时代一项重要的任务是研究并挖掘基因的功能,微生物也一样,即使是模式大肠杆菌仍有一半以上的基因为未知功能。对微生物基因组进行遗传改造,是真正实现驾驭微生物,为我所用的必须步骤。


|   技术流程

CRISPR/Cas9介导的基因敲除/敲入

1. 根据敲除基因序列设计sgRNA序列,构建Cas9-sgRNA敲除载体;

2. 融合PCR扩增,获得重组修复模板(缺失目的基因部分序列);

3. 将敲除载体和重组修复模板共同转染到细菌内;

4. Cas9-sgRNA复合体对目的基因进行切割,造成双链断裂(DSB);

5. 细菌利用带有部分目的基因缺失的重组修复模板对DSB进行修复,获得目的基因敲除菌株。

1.jpg


Red重组介导的基因敲除/敲入

1. 根据敲除基因设计同源臂序列,构建敲除载体,将敲除载体转染到细菌内;

2. 在Red重组酶作用下,敲除载体与目的基因发生同源重组,目的基因被抗性基因替换,通过抗性基因富集敲除菌株。


             



|   应用范围


大肠杆菌

枯草芽孢杆菌

假单胞菌

肺炎克雷伯菌

酿酒酵母

金黄色葡萄球菌

乳酸菌

毕赤酵母

假丝酵母

曲霉属真菌

希瓦氏菌

李斯特菌

沙门氏菌

镰刀菌

链格孢霉菌

谷氨酸棒状杆菌

酵母菌

念珠菌

鲍曼不动杆菌

伯克霍尔德氏菌

芽孢杆菌

链球菌

粪球菌




|   技术优势

(1) 独特的供体菌,不要求靶细菌具有用于插入突变筛选的抗生素抗性。

(2) 高效的供体菌接合系统,保证抗性质粒具有高的接合转移效率。

(3) 抗性载体为T线性化载体,可直接与纯化PCR产物连接,不需要考虑酶切位点,大大节省客户时间。

(4) 优化的抗性载体序列,最大化减少冗余区,从而提高接合转移效率,减少非特异重组的概率。

(5) 抗性载体具有自主开发的正向筛选基因Hygro,从而大大增加基于抗性载体基因敲除技术的适用范围,减少重组后突变克隆的筛选工作。

(6) 具有一系列不同抗性的质粒,保证具有某种抗性的靶细菌均有合适的抗性质粒使用。


|   案 例

1. 沙门氏菌基因敲除及回补实验

2. 大肠杆菌基因过表达


3. 酿酒酵母基因敲入


| 服务价格及周期

根据菌种及敲除基因具体情况评估价格,量大优惠;实验周期8-12周,具体时间视菌株的特异性而定。

详情可请致电咨询!400-990-6627 / 13013841564(微信同号)

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